英文名稱：KAPA HiFi HotStart ReadyMix?PCR Kit

中文名稱：KAPA HiFi高保真熱啟動DNA聚合酶預(yù)混液

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KAPA HiFi HotStart ReadyMix是一種DNA擴增預(yù)混液，包含引物和模板之外擴增完全反應(yīng)必需成分。適用PCR、NGS高通量測序文庫等的擴增。預(yù)混液所含KAPA HiFi DNA Polymerase是新型改造B族DNA聚合酶，錯誤率比野生型Taq DNA聚合酶低約100倍，成功率和產(chǎn)率比野生型B族proofreading活性的DNA聚合酶更高。

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HiFi 熱啟動高保真DNA聚合酶應(yīng)用

用于常規(guī)測序的PCR（直接測序或克隆PCR產(chǎn)物的測序）

新一代測序文庫擴增（與KAPA文庫擴增方案配合使用時）

擴增DNA片段用于克隆和蛋白質(zhì)表達或基因組表征

定點突變

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KAPA HiFi DNA聚合酶擴增特點

高DNA親和力，無需輔助蛋白和DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域

高持續(xù)合成能力

長片段擴增能力

選擇失活，低非特異性擴增

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KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶是一種新型B家族DNA聚合酶，經(jīng)過工程改造后對DNA的親和力增加，不需要輔助蛋白或DNA結(jié)合域。與野生型B家族DNA聚合酶相比，該酶固有的高持續(xù)合成能力可顯著提高合成產(chǎn)量，速度和靈敏度。此外，擴增長片段以及富含GC和AT片段的能力顯著提高。該酶與特有抗體結(jié)合，第一次變性步驟之前可以保持失活狀態(tài)。這可以防止反應(yīng)過程中的非特異性擴增，提高靈敏度，并提高反應(yīng)效率。

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組份（除引物和模板的擴增反應(yīng)液）

DNA聚合酶+緩沖液混合

— DNA聚合酶：0.5U /25μL反應(yīng)

— 緩沖液：dNTPs（每種dNTP 0.3mM，1X），MgCl₂（2.5mM，1X ）和穩(wěn)定劑

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KAPA HiFi高保真DNA聚合酶技術(shù)參數(shù)

聚合酶種類：改造B族DNA聚合酶

聚合酶活性：KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3′聚合酶和3’g5′核酸外切酶（proofreading）活性，但沒有5’g3′核酸外切酶活性。

擴增片段長度：可從基因組DNA中擴增高達15kb的目標或從較不復(fù)雜的目標擴增20kb。

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KAPA HiFi高保真DNA聚合酶預(yù)混液設(shè)計用于各種目標和大小片段的常規(guī)高保真PCR。它的錯誤率比野生型Taq DNA聚合酶低約100倍，成功率和產(chǎn)率比野生型B家族（proofreading）DNA聚合酶更高。另外，KAPA HiFi HotStart比野生型B家族DNA聚合酶需要更短的反應(yīng)時間。 KAPA HiFi HotStart DNA聚合酶具有5’g3′聚合酶和3’g5′核酸外切酶（proofreading）活性，但沒有5’g3′核酸外切酶活性。