產(chǎn)品英文名稱：Allophycocyanin Labeling Kit-NH2
產(chǎn)品中文名稱：別藻藍(lán)蛋白標(biāo)記試劑盒- NH2

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品特性
整個(gè)標(biāo)記過程僅需1個(gè)小時(shí)                         
整個(gè)標(biāo)記過程在1支過濾管中進(jìn)行              
熒光標(biāo)記抗體回收率高                                                
適用于50-200 μg的IgG 
    
Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 產(chǎn)品描述
藻膽蛋白是一種從藍(lán)藻和真核藻類中得到的熒光蛋白，它的熒光強(qiáng)度要比化學(xué)熒光探針，如熒光素和羅丹明高得多。因此，用藻膽蛋白標(biāo)記的抗體和其他分子在做流式細(xì)胞術(shù)和免疫染色時(shí)具有很高的靈敏度。別藻藍(lán)蛋白（APC）是一種藻膽蛋白，它在660 nm附近有藍(lán)色熒光。Allophycocyanin Labeling Kit-NH2能夠簡(jiǎn)便快速地制備被APC標(biāo)記的IgG，NH2-reactive APC（該試劑盒的成分之一）具有一個(gè)活性的酯基團(tuán)，不需任何活化就能夠輕易地與靶分子中的氨基形成共價(jià)鍵。試劑盒中的Filtration tube用來交換緩沖液和濃縮樣品IgG溶液。該試劑盒中包含了標(biāo)記產(chǎn)物的Storage buffer等用于APC標(biāo)記的所需的全部試劑。
*APC: Allophycocyanin (別藻藍(lán)蛋白)

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 試劑盒內(nèi)容
NH2-reactive APC…………… 3管       
Reaction buffer……………… 200 μl × 1管          
WS buffer…………4 ml × 1瓶
Filtration tube………3管

標(biāo)記IgG操作步驟
（1）將100 μl WS buffer以及含有100 μg IgG的樣品溶液加入到過濾管中。a）
（2）8,000-10,000 g離心10分鐘后，加入100 μl WS buffer再離心一次。b）
（3）離心完成后，將10 μl Reaction buffer加入到NH2-reactive APC中并用移液器吹打使其溶解。
（4）將含有NH2-reactive APC的溶液轉(zhuǎn)移到IgG所集中的過濾管的濾膜上。
（5）用移液器吸取溶液吹洗凈整個(gè)濾膜表面，然后將過濾管放入培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)2小時(shí)。
（6）將190 μl WS buffer加入到過濾管中并用槍吹打10到15次來回收標(biāo)記產(chǎn)物。c）將溶液轉(zhuǎn)移至0.5ml的試管中，并儲(chǔ)存于0-5℃下。d）
   a）樣品溶液的體積不應(yīng)超過100 μl。如果抗體濃度低于0.5 mg/ml，重復(fù)步驟1和2直至總的IgG聚積量達(dá)到100 μg。
  b）如果溶液在離心后仍然殘留在膜上，可以再離心5分鐘或者適當(dāng)增加轉(zhuǎn)速。
  c）標(biāo)記后產(chǎn)物的濃度為1.4-1.8 mg/ml。在進(jìn)行后續(xù)的酶免疫，免疫印跡，免疫轉(zhuǎn)染試驗(yàn)前先要將標(biāo)記后的IgG稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛取Ｃ總€(gè)IgG分子上會(huì)被標(biāo)記上1-2個(gè)APC分子。沒有被結(jié) 合的APC可能會(huì)干擾正常的免疫試驗(yàn)。如果需要純化的話，可以使用凝膠滲透柱或親合柱。
 d）通常，APC標(biāo)記后的IgG在Storage buffer中，0-5℃下至少能夠保存2個(gè)月，如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇（終濃度：50%），并在-20℃下存放。但是，還要注意樣品自身是否穩(wěn)定。

Allophycocyanin Labeling Kit-NH2 注意事項(xiàng)
用該試劑盒標(biāo)記的蛋白質(zhì)的分子量要>50,000。
 在標(biāo)記過程中，IgG或者Allophycocyanin-IgG標(biāo)記物始終在Filtration tube的濾膜上。
 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白質(zhì)，如BSA或明膠時(shí)，在使用該試劑盒標(biāo)記前，先要純化IgG溶液。IgG溶液能夠用IgG Purification Kits（不包含于本試劑盒中）來純化。
 如果IgG溶液含有小的不溶物，離心后取上清液來進(jìn)行標(biāo)記。