產(chǎn)品名稱(chēng)：GE 17-5442-02 Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml 淋巴細(xì)胞分離液 6 × 100 ml
產(chǎn)品貨號(hào)：17-5442-02?
GE Ficoll-Paque 淋巴細(xì)胞分離液是高分子量蔗糖聚合物和泛影酸鈉溶液。Ficoll-Paque密度梯度介質(zhì)利用簡(jiǎn)單快速離心程序從少量或大量血液中有效提取高產(chǎn)和高純度的活單核細(xì)胞。Ficoll-Paque PLUS是無(wú)菌即用型產(chǎn)品，推薦用于單個(gè)核細(xì)胞的常規(guī)分離。
主要特征
- 經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制測(cè)試
- 分離所得的細(xì)胞存活細(xì)胞率>90%
- 低水平內(nèi)毒素
- 質(zhì)量管理系統(tǒng)下生產(chǎn)，符合ISO 13485:2003標(biāo)準(zhǔn)（Ficoll-Paque PREMIUM）
- 正確存儲(chǔ)條件下穩(wěn)定性至少保持3年
Ficoll-Paque淋巴細(xì)胞分離液產(chǎn)品分類(lèi)
- Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml單個(gè)核細(xì)胞分離液適用血液、骨髓和臍帶血來(lái)源的人單個(gè)核細(xì)胞分離制備，臨床研究和細(xì)胞治療生產(chǎn)級(jí)別。后續(xù)可以通過(guò)培養(yǎng)分離得到間充質(zhì)干細(xì)胞。
- Ficoll-Paque PREMIUM 1.073,1.073 g/ml 單個(gè)核細(xì)胞分離液適用密度較低的人單個(gè)核細(xì)胞的富集，如間充質(zhì)干細(xì)胞和單核細(xì)胞，同樣應(yīng)用于臨床研究和細(xì)胞治療。
- Ficoll-Paque PLUS 用于人外周血的單個(gè)核細(xì)胞分離，僅供科研使用。
GE Ficoll-Paque 獲得的單個(gè)核細(xì)胞（含淋巴細(xì)胞）懸液具有以下特點(diǎn)：
- 分離所得的細(xì)胞中95 ± 5%為單個(gè)核細(xì)胞
- 分離所得的細(xì)胞存活細(xì)胞率 > 90%
- 可回收原始的血液樣本中60 ± 20%的單個(gè)核細(xì)胞
- 3 ± 2%的粒細(xì)胞
- 5 ± 2%的紅細(xì)胞
Ficoll-Paque PLUS淋巴細(xì)胞分離液產(chǎn)品參數(shù)：
物理狀態(tài)：無(wú)色液體
密度：1.078 g/ml
pH范圍：5.5-7.5
內(nèi)毒素活性：< 0.12 EU/ml
有效期：3年
保存：4℃-30℃
成分：Ficoll-Paque PLUS是一種無(wú)菌的、即用型的試劑，含有Ficoll PM400、泛影酸鈉和二鈉鈣EDTA。密度已經(jīng)被優(yōu)化，用于分離外周血的人淋巴細(xì)胞。
應(yīng)用
人外周血、骨髓和臍帶血淋巴細(xì)胞分離
骨? 髓、胎盤(pán)間充質(zhì)干細(xì)胞分離
?密度梯度離心原理
見(jiàn)圖，以人外周血為例，血液加入Ficoll-Paque密度梯度分離液后離心分層，從上到下分四層：
血漿層
單個(gè)核細(xì)胞層：淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板（骨髓和臍帶血等樣本還有間充質(zhì)干細(xì)胞）
Ficoll-Paque分離液層：密度1.077g/mL
紅細(xì)胞、粒細(xì)胞層
紅細(xì)胞和多形核粒細(xì)胞比重較大，為1.092左右，而淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞比重較小，為1.075～1.090。Ficoll-Paque密度1.077g/mL介于兩者之間，并且分離液中的Ficoll PM400是一種高聚糖，能促進(jìn)紅細(xì)胞凝集。
操作步驟
使用前把Ficoll-Paque density gradient media加熱到18°C – 20°C。若樣本量超過(guò)3mL，換用直徑更大的離心管，以保證Ficoll-Paque 分離液：2.4 cm，血液樣本：3.0 cm的高度。
樣本制備
使用新鮮血液確保所分離的單個(gè)核細(xì)胞的活性。樣本也要加熱到18°C – 20°C。
1.?10mL離心管加入2mL抗凝血和等量的平衡鹽溶液。
2.?顛倒或吸管混勻血液和緩沖液。
單個(gè)核細(xì)胞分離步驟
1.?Ficoll-Paque試劑瓶顛倒多次混勻。
注射器法吸取Ficoll-Paque分離液：
見(jiàn)圖，去掉聚丙烯蓋，插入注射器針頭。
吸管法吸取Ficoll-Paque分離液：
去掉聚丙烯蓋，拉起鋁環(huán)，拉開(kāi)金屬密封，移除銀環(huán)。拿掉橡膠密封，無(wú)菌操作吸取需要的Ficoll-Paque分離液。
離心管加入3mLFicoll-Paque分離液。
稀釋過(guò)的血液樣本小心鋪到Ficoll-Paque分離液上面。
注意：鋪樣本時(shí)小心不要和Ficoll-Paque分離液混合。
離心400g，30-40min。18°C – 20°C。
用無(wú)菌吸管吸掉上層血漿和血小板，不要碰到單個(gè)核細(xì)胞層（圖4，圖5）。
無(wú)菌吸管轉(zhuǎn)移單個(gè)核細(xì)胞層到無(wú)菌離心管。
洗滌分離細(xì)胞
1.?預(yù)估轉(zhuǎn)移的單個(gè)核細(xì)胞的體積。加入至少3倍體積的平衡鹽溶液（約6mL）。
2.?用吸管輕柔重懸細(xì)胞。
3.?離心，400-500g，10-15min，18°C – 20°C。
注意：高速離心會(huì)加速單個(gè)核細(xì)胞的回復(fù)。但是，低速離心（60-100g）能去除血小板。
4.?去掉上清。
5.?6-8mL平衡鹽溶液重懸單個(gè)核細(xì)胞。
6.?離心，400-500g（或60-100g），10min，18°C – 20°C。
7.?去上清。
8.?使用下游所需液體重懸細(xì)胞沉淀。
產(chǎn)品訂購(gòu)信息
品牌?貨號(hào)?產(chǎn)品描述?包裝
GE?17-1440-02?Ficoll-Paque PLUS,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液?6 × 100 ml
GE?17-1440-03?Ficoll-Paque PLUS,1.078 g/ml淋巴細(xì)胞分離液?6 × 500 ml
GE?17-5442-02?Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml淋巴細(xì)胞分離液?6 × 100 ml
GE?17-5442-03?Ficoll-Paque PREMIUM,1.077 g/ml淋巴細(xì)胞分離液?6 × 500 ml
GE?17-5446-52?Ficoll-Paque PREMIUM 1.073,1.073 g/ml 淋巴細(xì)胞分離液?6× 100 ml
