產(chǎn)品名稱：Agilent 5191-4079 SureSelect enzymatic fragmentation kit, 16 reactions?

產(chǎn)品貨號： 5191-4079

產(chǎn)品介紹:

適用于DNA起始量在10ng-200ng之間的各種GC含量、不同樣本類型（血液、新鮮冷凍組織和FFPE），推薦在37攝氏度酶解15分鐘。

酶裂解的熱循環(huán)程序

碎片持續(xù)時間基于樣本類型和NGS讀取長度

1.準備基因組DNA樣本并分析其質(zhì)量

文庫制備方案要求輸入10 ng到200 ng的gDNA，初始DNA樣品體積為7 ul，用于酶促DNA損傷對于某些FFPE樣品，DNA輸入量或定量方法可能需要調(diào)整。如下詳細。為了獲得最佳的測序結(jié)果，在推薦范圍內(nèi)使用最大數(shù)量的DNA輸入

2.從新鮮生物樣品中制備高質(zhì)量的Gdna

采用合適的純化系統(tǒng)，如Qiagen’s QIAamp DNA迷你試劑盒，按照制造商的協(xié)議進行純化準備請注意確保基因組DNA樣本質(zhì)量高，OD為260/280范圍從1.8到2.0.使用Oubit BR dsDNA檢測試劑盒測定每個gDNA樣品的濃度。按照制造商對儀器和檢測試劑盒的說明操作從新鮮生物樣本中提取的DNA不需要額外的DNA樣本鑒定。

3.從FFPE樣品中制備和鑒定gDNA

使用Qiagen’s QIAamp DNA FFPE組織試劑盒和Qiagen’s QIAamp DNA FFPE Tissue Kit，按照制造商的協(xié)議從FFPE組織切片中制備gDNA。分兩輪洗脫MinElute柱上的fina gDNA樣品，每輪使用30 ul緩沖液ATE。最終洗脫體積約為60 ul。

請注意如果組織在蛋白酶K消化一小時后出現(xiàn)不完全裂解。加入另外10 ul的蛋白酶K，在56℃繼續(xù)孵育。周期性的混合，持續(xù)3個小時。

將gDNA樣本保存在冰中，以便當天文庫準備，或在-20℃保存以備日后處理。

SureSelect平臺兼容性SureSelect酶促破裂試劑盒與下面表1所列的特定SureSelect平臺及其支持協(xié)議兼容。

請注意SureSelect酶斷試劑盒尚未優(yōu)化用于SureSelect^XT、SureSelect^QXT或SureSelect ^XT2體系。酶DNA片段下游的工作流程步驟詳見表1所列的SureSelect用戶手冊。

表1兼容SureSelect平臺

SureSelect平臺 ?????????平臺議定書文件編號

SureSelect XT HS2 DNA ????G9983 – 90000

SureSelect XT HS ?????????G9702 –?90000

SureSelect XT ?Low input ??G9703-90000 ??G9703-90050(雙索引庫)

產(chǎn)品名稱：Agilent 5191-4079 SureSelect enzymatic fragmentation kit, 16 reactions?

產(chǎn)品貨號： 5191-4079

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